使用奧林巴斯正置熒光顯微鏡 CX33 觀察大腸桿菌，通常需先對大腸桿菌進行熒光染色，再按規(guī)范操作顯微鏡進行觀察，具體步驟如下：

樣品準備

培養(yǎng)大腸桿菌：將大腸桿菌接種到適宜的培養(yǎng)基中，如 LB 培養(yǎng)基，在 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至對數(shù)生長期，一般培養(yǎng)時間為 6-8 小時左右。

染色：根據(jù)觀察目的選擇合適的熒光染料。若觀察大腸桿菌的 DNA，可使用 DAPI 染料；若觀察特定蛋白，可使用與相應(yīng)抗體結(jié)合的熒光染料。例如用 DAPI 染色時，取少量菌液于載玻片上，滴加適量 DAPI 染液，染色 5-10 分鐘。

制片：染色結(jié)束后，蓋上蓋玻片，盡量避免產(chǎn)生氣泡。若菌液過多，可用吸水紙吸去多余液體。

顯微鏡操作

放置與檢查：將顯微鏡平穩(wěn)放置在實驗臺上，置于身體前方略偏左位置。檢查顯微鏡各部件是否完好，目鏡、物鏡是否清潔，調(diào)焦旋鈕、載物臺移動旋鈕等能否正常操作，光源是否能正常發(fā)光。

放置裝片：打開載物臺的夾具，將制作好的裝片平穩(wěn)放置在載物臺上，使樣品位于通光孔的正中央，然后輕輕夾緊裝片。

選擇物鏡：先使用低倍物鏡（如 4× 或 10×）進行初步觀察，便于快速找到樣品并確定觀察區(qū)域。

調(diào)節(jié)光源：開啟顯微鏡電源開關(guān)，通過亮度調(diào)節(jié)旋鈕將光源亮度調(diào)至適中，開始時可將亮度調(diào)得稍低，再根據(jù)觀察情況調(diào)整。

調(diào)節(jié)聚光器和孔徑光闌：調(diào)節(jié)聚光器的高度，使光線集中照射在樣品上。根據(jù)樣品特性和觀察需求調(diào)整孔徑光闌大小，低倍觀察時可適當開大，高倍觀察時應(yīng)縮小，以獲得合適的對比度和分辨率。

粗調(diào)對焦：轉(zhuǎn)動粗調(diào)焦旋鈕，使鏡筒緩慢下降，同時從側(cè)面觀察物鏡與裝片的距離，直到物鏡接近裝片但不接觸。然后通過目鏡觀察，反向轉(zhuǎn)動粗調(diào)焦旋鈕，使鏡筒緩慢上升，直到看到模糊的圖像。

微調(diào)對焦：使用微調(diào)焦旋鈕，對圖像進行精細調(diào)節(jié)，使圖像達到最清晰狀態(tài)。

轉(zhuǎn)換高倍物鏡：若需要更詳細地觀察細節(jié)，在低倍物鏡下將感興趣的區(qū)域調(diào)整到視野中心后，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，更換高倍物鏡（如 40× 或 100×），更換后通常只需微調(diào)焦旋鈕即可使圖像再次清晰。

熒光觀察與記錄

選擇熒光濾光片：根據(jù)所使用的熒光染料，選擇相應(yīng)的熒光濾光片。例如觀察 DAPI 染色的大腸桿菌，需選擇適合 DAPI 激發(fā)和發(fā)射波長的濾光片。

觀察熒光圖像：通過目鏡觀察大腸桿菌的熒光圖像，調(diào)整光源亮度、焦距等，使熒光信號清晰可見。注意觀察熒光的分布、強度等特征。

圖像采集：如果顯微鏡配備了成像系統(tǒng)，將其與顯微鏡正確連接，并打開相應(yīng)的成像軟件。調(diào)整成像軟件中的參數(shù)，如曝光時間、增益等，以獲得最佳的熒光圖像效果，然后點擊拍攝按鈕，獲取圖像并保存。