在培養箱內進行明場和熒光觀察細胞運動,需要借助特定的儀器設備,并遵循一定的操作規范和注意事項,以確保能夠準確、實時地捕捉到細胞的動態變化。以下是相關介紹:
主要設備及特點
箱內明場 / 熒光多孔板活細胞工作站:可在培養箱環境中連續對多孔板中的活細胞進行明場和熒光成像,通過移動鏡頭對多孔板內的細胞按區域依次成像,掃描結束后自動拼接成全板完整圖像,避免挪動培養板對細胞生理的干擾。該設備支持遠程監控和分析,硬件和電子器件能在 5-40°C 及 20-95% 的濕度環境下運行,兼容 6-384 孔多孔培養板、培養皿、T25-T225 培養瓶等多種透明培養容器。
全自動活細胞監控系統:可開放式地放在二氧化碳培養箱內,配備 4X、10X、20X 物鏡,具有紅、綠、藍三色熒光通道及明場通道,可同時進行四個光通道的延時成像。采用科研級高感光 CCD,配有全自動電動載物臺,能實現 Z 軸自動聚焦、自動熒光通道切換、自動高通量圖像采集和疊加等功能,還可自主編輯并自動批量生成視頻,自動生成多種分析數據。
這是一種小型化培養箱內熒光顯微鏡,支持 3 通道熒光,可通過 APP 遠程監控,適合中小規模實驗,能夠在接近細胞生理環境下實時、動態追蹤細胞運動。
觀察方法及要點
明場觀察:利用普通的透射光照明,直接觀察細胞的形態、輪廓和運動情況。適用于觀察細胞的整體形態、遷移、增殖等較為宏觀的動態變化。在培養箱內進行明場觀察時,要注意選擇合適的光源強度和物鏡倍數,以獲得清晰的圖像。
熒光觀察:首先需要對目標細胞或分子進行特異性熒光標記,如用 CFSE 標記細胞 A,CellTracker Red 標記細胞 B,或者通過基因編輯讓細胞表達熒光蛋白等。然后選擇合適的熒光通道進行觀察,可實時追蹤細胞的運動、細胞間的相互作用以及分子的動態變化等。在熒光觀察過程中,要注意控制熒光激發光的強度和時間,避免對細胞產生光毒性,影響細胞的正常運動和生理狀態。
數據分析:結合時間序列的明場和熒光圖像,可通過軟件量化細胞運動的關鍵參數,如細胞的遷移速度、方向改變、運動軌跡等。例如,通過 TrackMate 插件可以追蹤細胞的運動軌跡,分析細胞運動的速度和方向變化;利用 ImageJ 或 CellProfiler 等軟件可以計算熒光信號的強度變化、共定位系數等,從而進一步了解細胞運動與細胞內分子變化的關系。
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