使用奧林巴斯 CX33 顯微鏡明場和熒光觀察菌絲孢子，可參考以下方法：

明場觀察

樣品準(zhǔn)備：

水浸法：取少量菌絲置于載玻片，滴加蒸餾水后加蓋玻片，適用于觀察活體菌絲動態(tài)。

乳酸酚棉藍(lán)染色法：對菌絲與孢子進(jìn)行對比染色，增強(qiáng)結(jié)構(gòu)可見性。例如，曲霉菌絲的分生孢子梗經(jīng)染色后，頂囊、小梗及分生孢子層次分明。

顯微鏡設(shè)置：

打開顯微鏡電源，調(diào)節(jié)亮度調(diào)節(jié)旋鈕，使內(nèi)置 2.4W LED 透射光柯勒照明系統(tǒng)提供合適的亮度，該系統(tǒng)可提供均勻冷光源，避免熱損傷菌絲。

根據(jù)需要選擇合適的平場消色差物鏡，如 4X 或 10X 物鏡用于低倍定位，40X 或 100X 物鏡用于高倍觀察。奧林巴斯 CX33 的物鏡可有效消除像差，確保菌絲與孢子在全視場內(nèi)清晰成像。

調(diào)節(jié)載物臺高度，其垂直運動行程 15mm，粗調(diào)每圈 36.8mm，微調(diào)精度 2.5μm，支持從低倍快速定位到高倍精細(xì)聚焦。

調(diào)節(jié)三目觀察筒的瞳距，調(diào)節(jié)范圍 48 - 75mm，其 30° 傾斜設(shè)計符合人體工學(xué)，減少觀察疲勞。同時，可根據(jù)需要將光路切換為目鏡觀察或相機(jī)光路，便于實時記錄。

觀察與記錄：

低倍定位：使用 4X 或 10X 物鏡，通過粗調(diào)旋鈕快速定位菌落邊緣。

高倍觀察：切換至 40X 或 100X 物鏡，微調(diào)焦距至圖像清晰，觀察菌絲有無隔膜、分支角度（如對生、互生）及孢子形態(tài)（如大小、顏色、表面紋飾）。

圖像采集：連接 DP27 相機(jī)等成像設(shè)備，通過 cellSens 軟件記錄菌絲網(wǎng)絡(luò)與孢子分布特征。

熒光觀察

樣品準(zhǔn)備：

選擇合適的熒光染料對菌絲孢子進(jìn)行染色。例如，可使用 Calcofluor White 等染料對真菌細(xì)胞壁進(jìn)行染色，使其在熒光下發(fā)出明亮的信號。將菌絲孢子樣品與染料按照一定的比例混合，在適當(dāng)?shù)臈l件下孵育一段時間，然后用緩沖液沖洗，去除未結(jié)合的染料，制成熒光染色的樣品玻片。

顯微鏡設(shè)置：

安裝熒光模塊：如果 CX33 顯微鏡本身未配備熒光裝置，需要安裝合適的熒光附件，如熒光光源及相應(yīng)的濾光片組。確保熒光光源的強(qiáng)度和穩(wěn)定性，以及濾光片的選擇與所使用的熒光染料相匹配，以實現(xiàn)最佳的熒光激發(fā)和發(fā)射效果。例如，對于常見的藍(lán)色熒光染料，可選擇激發(fā)波長為 450 - 490nm，發(fā)射波長為 515 - 555nm 的濾光片組。

切換觀察模式：將顯微鏡的觀察模式切換為熒光模式。通常需要將聚光器轉(zhuǎn)盤設(shè)置到熒光（FL）位置，以阻擋透射光，減少背景噪音。

觀察與記錄：

調(diào)節(jié)熒光亮度和焦距：打開熒光光源，調(diào)節(jié)亮度至合適的水平，避免熒光信號過強(qiáng)或過弱。同時，通過微調(diào)旋鈕精確調(diào)節(jié)焦距，使菌絲孢子的熒光圖像清晰可見。

觀察熒光分布和特征：在熒光顯微鏡下，觀察菌絲孢子發(fā)出的熒光顏色、強(qiáng)度、分布等特征。不同的熒光染料可能會標(biāo)記不同的細(xì)胞結(jié)構(gòu)或成分，通過觀察熒光的分布可以了解菌絲孢子的內(nèi)部結(jié)構(gòu)和生理狀態(tài)。例如，某些染料可能特異性地標(biāo)記細(xì)胞核、細(xì)胞壁或細(xì)胞質(zhì)，從而幫助區(qū)分不同的細(xì)胞部位。

圖像采集與分析：使用顯微鏡配套的數(shù)碼成像系統(tǒng)，如連接相機(jī)并通過相關(guān)軟件進(jìn)行圖像采集和分析?？梢耘臄z不同視野下的熒光圖像，記錄菌絲孢子的熒光形態(tài)和分布情況，以便后續(xù)進(jìn)一步分析和比較。

觀察結(jié)束后，關(guān)閉顯微鏡電源，對顯微鏡進(jìn)行清潔和維護(hù)，將物鏡轉(zhuǎn)離光路，取下樣品玻片，用干凈的軟布擦拭載物臺和物鏡等部件，保持顯微鏡的清潔和良好狀態(tài)，以便下次使用。