使用徠卡 DM750 P 偏光顯微鏡觀察西藥結晶晶體顆粒，需結合其光學特性與藥物晶體的雙折射現象，以下為具體操作指南及分析要點：

一、徠卡 DM750 P 的適配性優勢

無應力光學系統：

DM750 P 采用偏振等級 5 的無應力物鏡（如 63 倍物鏡），避免光學部件自身雙折射干擾，確保藥物晶體的真實雙折射信號（如磺胺類、阿司匹林晶體的典型干涉色）。

寬范圍物鏡組合：

2.5 倍概覽物鏡：快速定位晶體分布（如片劑崩解后的顆粒聚集區）；

10-40 倍物鏡：觀察晶體形態（針狀、片狀、棱柱狀）及團聚狀態；

63 倍油鏡：解析晶體邊緣細節（如晶面夾角、解理紋）。

智能偏光控制：

內置可旋轉起偏器（0-360°）和固定檢偏器（正交 / 平行模式），支持一鍵切換明場 / 偏光模式，適合西藥顆粒的動態觀察（如溶劑揮發過程中晶體生長）。

二、樣品制備與觀察流程

1. 樣品預處理

混懸液法：將西藥顆粒（如原料藥粉末）分散于液體石蠟或甘油中，避免靜電團聚，厚度≤50μm（防止光程過長導致干涉色飽和）。

薄片法：針對片劑或膠囊內容物，用刀片刮取少量樣品，夾于載玻片 - 蓋玻片之間，輕壓成單層顆粒（適合晶型一致性分析）。

注意：避免高溫制片（如熔融結晶），防止晶型轉變（如布洛芬的 α/β 晶型差異）。

2. 顯微鏡參數設置

光路校準：

開啟內置 LED 光源（產熱低，避免晶體熱損傷），調節亮度至 10-20%（保護人眼同時減少光漂白）；

旋轉起偏器至 0°，檢偏器至 90°（正交偏光），觀察空白載玻片應呈全暗（驗證偏光正交性）。

載物臺校準：

確保旋轉載物臺中心與物鏡光軸重合（通過十字刻度校準，誤差＜5μm），避免晶體旋轉時偏離視野（適合晶軸定向分析）。

3. 觀察與記錄

正交偏光下的典型現象：

消光現象：旋轉載物臺（0-360°），晶體每轉 90° 出現一次消光（各向異性晶體特征，如對乙酰氨基酚的單斜晶系）；

干涉色：根據晶體厚度和雙折射率，呈現彩虹色（如磺胺嘧啶銀的一級灰至二級藍），結合石膏試板（λ=550nm）定量雙折射值；

晶體形態：記錄顆粒長寬比（如阿莫西林的針狀晶體長徑比＞5:1）、邊緣規整性（區分單晶與多晶聚集體）。

動態觀察：

開啟延時攝影（如每 5 分鐘拍攝一次），監測溶劑揮發過程中晶體的析出順序（如鹽酸氨溴索從無定形到晶體的轉變）。

三、西藥晶體分析關鍵指標

晶型鑒別：

單折射晶體（如氯化鈉）：全消光，無干涉色；

雙折射晶體（如布洛芬）：旋轉載物臺出現四次消光，干涉色隨厚度變化；

混晶判斷：視野中同時存在多種干涉色或消光行為（如卡馬西平的 Form I/III 混晶）。

顆粒表征：

尺寸分布：通過徠卡 LAS X 軟件測量等效圓直徑（如 API 顆粒 D50 應＜20μm 以保證溶出度）；

表面紋理：觀察解理裂紋（如乙酰水楊酸的劈裂面）、臺階狀生長紋（提示結晶動力學）。

純度評估：

雜質晶體（如中間體殘留）常表現為異常干涉色或消光行為（如撲爾敏中混有馬來酸雜質時，出現局部強雙折射）。

四、注意事項與進階技巧

光程補償：

對于厚晶體（＞100μm），使用 λ/4 波片補償光程，避免高階干涉色重疊（如頭孢呋辛酯的柱狀晶體）。

環境控制：

開啟顯微鏡內置溫臺（37℃±0.1℃），模擬體內溶出環境，觀察溫度敏感型晶體的相變（如茶堿的水合物脫水過程）。

聯用技術：

偏光結果結合 XRD（確認晶型）、DSC（熱穩定性），例如：通過偏光發現某批次硝苯地平晶體出現異常消光，進一步 XRD 證實為亞穩態 Form B。

五、典型案例：阿司匹林晶體觀察

樣品：阿司匹林原料藥粉末（乙醇重結晶）；

觀察：正交偏光下呈菱形片狀，旋轉載物臺至 45° 時出現二級黃干涉色，消光角與晶面夾角吻合（證實單斜晶系）；

分析：邊緣光滑無裂紋，提示結晶工藝穩定；無雜色顆粒，純度＞99.5%（符合藥典標準）。

通過徠卡 DM750 P 的高分辨率偏光成像與智能分析，可快速實現西藥晶體的晶型鑒別、顆粒表征及工藝優化，尤其適用于原料藥質控、仿制藥一致性評價及結晶工藝開發。